Las células de mamíferos, adherentes o no adherentes, se marcan primero con HOOK™ Sulfo-NHS-SS-Biotina. GANCHO™ Sulfo-NHS-SS-Biotina es un reactivo de biotinilación reactivo a aminas soluble en agua que tiene un éster de N-hidroxisulfosuccinimida (sulfo-NHS) (ver tabla). La adición de un sulfonato cargado (SO3-) en el anillo de N-hidroxisuccinimida de los ésteres de sulfo-NHS da como resultado su solubilidad en agua, pero evita que penetre en las membranas plasmáticas. La solubilidad e impermeabilidad a las membranas plasmáticas hace que HOOK™ Sulfo-NHS-SS-Biotina es ideal para estudiar las proteínas de la superficie celular, ya que solo reaccionará con las moléculas de proteínas en la superficie externa de las membranas plasmáticas. Una ventaja adicional de HOOK™ Sulfo-NHS-SS-Biotina es la presencia de un enlace disulfuro en el brazo espaciador. El enlace disulfuro permite la escisión de la fracción de biotina de la proteína, lo que hace que su interacción con la avidina/estreptavidina sea reversible.
Después del etiquetado, las células se lisan con células de mamíferos PE LB™, una solución de lisis tamponada que emplea un detergente suave no iónico para mejorar la extracción y la estabilidad de las proteínas, y el lisado celular se aplica a una columna de estreptavidina agarosa. Las proteínas intracelulares no marcadas se eliminan y las proteínas de la superficie celular marcadas con biotina se liberan mediante la reducción del enlace disulfuro con DTT.
HOOK™ sulfo-NHS-SS-Biotina
PESO MOLECULAR: 606.69
BRAZO ESPACIADOR (Å): 24.3
GRUPO REACTIVO: sulfo-NHS-éster
MEMBRANA PERMEABLE: NO
SOLUBLE EN AGUA: SÍ
ESCINDIDO / REVERSIBLE: SÍ
pH REACTIVO: 7-9
Después del etiquetado, las células se lisan con Mammalian Cell PE LB,™ una solución de lisis tamponada que emplea un detergente no iónico suave para mejorar la extracción y la estabilidad de las proteínas, y el lisado celular se aplica a una columna de agarosa de estreptavidina. Las proteínas intracelulares no marcadas se eliminan y las proteínas de la superficie celular marcadas con biotina se liberan mediante la reducción del enlace disulfuro con DTT.
El kit se suministra con todos los reactivos y tampones necesarios para mayor comodidad y reproducibilidad. El kit es compatible con una amplia variedad de células de mamíferos y se puede utilizar para comparar células tratadas y no tratadas y diferencias entre diferentes líneas celulares. Este kit se suministra con reactivos suficientes para cinco experimentos, cada uno de los cuales consta de cuatro T-75 cm confluentes al 90-95%2 Frascos.
Funciones
Etiquetado y aislamiento completo de biotina en la superficie celular.
Adecuado para una amplia selección de células de mamíferos.
Aplicaciones
Para el aislamiento de proteínas de la superficie celular.
Para el estudio del tráfico de superficie celular.
Para el estudio de las interacciones receptor:ligando.